Introducción

El virus del síndrome de la mancha blanca o WSSV (por sus siglas en inglés) es el virus de mayor virulencia reportado en la industria camaronera. Los organismos infectados presentan manchas blancas de 0.5-3 mm de diámetro en el exoesqueleto, letargo, coloración rojiza en urópodos, telson, pereiópodos y pleópodos, con mortalidades masivas en los primeros 30 días de cultivo. El WSSV fue reportado por primera vez en México en 1999, afectando al estado de Sonora donde ocasionó grandes pérdidas económicas en el 2010. El WSSV posee la capacidad para infectar al menos 93 especies, en su mayoría crustá- ceos decápodos. Además, es difícil de controlar ya que se transmite de manera horizontal y vertical. Los camarones peneidos poseen un sistema inmune innato que los protege de microorganismos dañinos y que presenta dos tipos de respuesta (celular y humoral), actuando en conjunto para eliminar los agentes patógenos.

Este sistema inmune sin capacidad de memoria está mediado por los hemocitos que poseen capacidad citotóxica y comunicación intercelular que le facilita las funciones de: reconocimiento, coagulación, fagocitosis, melanización, formación de nódulos y encapsulación. Así mismo, los camarones cuentan también con la presencia de varios componentes plasmáticos, como un sistema profenoloxidasa y la cascada de coagulación que favorece la destrucción de agentes patógenos.

Actualmente, el interés en la prevención de enfermedades a través de la inmunoestimulación ha aumentado para hacer frente a los problemas virales, ya que los compuestos inmunoestimulantes alertan al sistema inmune innato de los organismos provocando una respuesta. La ventaja de los inmunoestimulantes radica en que no generan resistencias ni habituación, por lo que no retardan el crecimiento y pueden usarse en forma continua, facilitando su dosificación en las dietas.

En crustáceos, los carotenoides actúan como antioxidantes y precursores de la vitamina A, además incrementan la resistencia a enfermedades, mejoran su tasa de reproducción y aumentan la ganancia de peso. Dentro de los carotenoides, los ?-carotenos son los de mayor importancia por encontrarse en mayor cantidad y son utilizados en la acuacultura como pigmentos, antioxidantes y fuentes de vitamina A. Los ?-carotenos son acumulados y almacenados dentro de los cloroplastos en la microalga Dunaliella sp. cuando es cultivada en medio con deficiencia de nitrógeno, y le imparten su coloración típica. El uso de ?-carotenos en la dieta incrementa la resistencia del camarón blanco del Pacífico Litopenaeus vannamei a infecciones experimentales con WSSV. Además, la adición de carotenos a la dieta mejora los parámetros de producción y la pigmentación de L. vannamei y del camarón azul Litopenaeus stylirostris. El objetivo del presente estudio fue evaluar la respuesta del sistema inmune de L. vannamei alimentado con dietas ricas en Dunaliella sp. con altas concentraciones de ?-caroteno, frente a una infección con el WSSV.

Materiales y Métodos Fuente de ?-carotenos y dietas experimentales:

Se obtuvo Dunaliella sp. del cepario del Departamento de Investigaciones Científicas y Tecnológicas de la Universidad de Sonora, donde se utilizó el medio F/8 para su cultivo que contiene una reducción en la cantidad de nitratos. La microalga fue cultivada en un sistema escalonado, empezando con un tubo de ensayo de 10 mL, pasando a matraz de 250 mL, posteriormente a matraz de 1 L y finalmente a recipientes de 20 L. Una vez obtenida la concentración celular máxima se cosechó el cultivo para su floculación con 0.15 g/L de sulfato de aluminio. El concentrado de Dunaliella sp. fue congelado a -80°C para su liofilización con el Telstar LyoQuest® y así obtener una harina de Dunaliella sp. Se evaluó la concentración de ?-carotenos en Dunaliella sp., tomando una muestra de 30 mg de harina y añadiendo 10 mL de acetona al 90%. Esta mezcla se mantuvo por 24 h en la oscuridad y se midió la concentración por espectrofotometría a 453 nm, utilizando una curva de ?-caroteno como estándar (5.3 mg de ?-caroteno en 25 mL). Con este procedimiento se ajustó la concentración del ?-caroteno a 0.42 mg/mL en la microalga. Se elaboró dietas experimentales, una dieta control y dos dietas suplementadas con harina de Dunaliella sp. (1 y 2%), de acuerdo a la composición presentada en la Tabla 1.

Camarones: Se utilizó juveniles del camarón L. vannamei con un peso promedio de 6 g, provenientes de la granja acuícola Ojai, ubicada en Bahía de Kino, Sonora, México. Para confirmar la ausencia del virus de la mancha blanca en estos camarones previo a su uso en el bioensayo, se efectuó un análisis por qPCR, utilizando la sonda VP28 del WSSV, mediante el kit iQ™ SYBER® GREEN Supermix.

Diseño experimental: Se evaluaron los siguientes cuatro tratamientos por triplicado: 1) 1% de biomasa de Dunaliella sp. en el alimento para camarones infectados con WSSV; 2) 2% de Dunaliella sp. en el alimento para camarones infectados con WSSV; 3) alimento control sin suplementación con Dunaliella sp. y camarones infectados con WSSV (Control positivo); 4) alimento control sin suplementación con Dunaliella sp. y camarones no infectados (Control negativo). Se colocó 40 camarones por acuario con 20 L de agua de mar (salinidad de 35 g/L), manteniendo la temperatura en 28-29°C, aireación continua y recambio del 60% de agua cada tres días. Los animales fueron alimentados con las dietas experimentales (5% de su biomasa) en dos raciones diarias durante 30 días previo a la infección con WSSV. Se infectó a los camarones por alimentación forzada utilizando una jeringa y una sonda, administrando 100 mL de un inóculo con WSSV. Se colectó muestras de hemolinfa en el quinto par de pereiópodos a las 0, 24, 48, 72, 120 y 144 horas post-infección (hpi).

Resultados Se encontró la tasa de supervivencia más alta en los camarones alimentados con la dieta que tenía 1% de harina de Dunaliella sp., seguido de los camarones alimentados con la dieta que tenía 2% de harina de la microalga (Tabla 2). En ambos casos la tasa de supervivencia fue mayor al 80%; mientras que el tratamiento control positivo (con infección) presentó un 56% de supervivencia. No se registró mortalidad en el control negativo (sin infección). No se detectó diferencia significativa en la actividad de la lisozima entre tratamientos. Sin embargo, se observó que los camarones alimentados con 1% de Dunaliella sp. incrementaron significativamente la actividad de la lisozima en el plasma a las 24 y 72 horas post-infección (hpi). Se encontró variaciones en el tiempo después de la infección, observándose fluctuaciones hasta las 120 hpi, tiempo después del cual ya no se detectó actividad de la lisozima en ninguno de los tratamientos. No se detectó diferencia significativa entre tratamientos, en la aglutinación de los hemocitos del camarón, a pesar de observar valores ligeramente mayores en el tratamiento con 1% de harina de Dunaliella sp.

Tabla 2: Porcentaje de supervivencia en juveniles del camarón L. vannamei alimentados durante 30 días con varias dietas experimentales y expuestos a una infección con WSSV (114 horas post-infección).

Fuente: Cámara Nacional de Acuacultura|ElProductor.com

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